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神经氨酸苷酶/NRH活检测方法
添加时间:2018-01-17 11:08:28   点击次数:  1557  次

上海鼓臣生物技术有限公司
  NRH 活性检测 
  (Neuraminidase) 
  GCB1226 
1.0 原理 neuraminidase 
 Sialyllactose + H2O N-Acetylneuraminate + Lactose 
 N-acetylneuraminic acid aldolase 
N-Acetylneuraminate N-Acetyl-D-mannosamine +Pyruvate 
  Lactate dehydrogenase 
Pyruvate +NADH+H+ L-Lactate +NAD+ 

NADH 的消失可以通过 340nm 的光吸收进行检测。
 
2.0 试剂:
 
A .0.1MPIPES-NaOH 缓冲液,pH 6.5 B .8.0Mm Sialyllactose
 
C .50mMCaCl2
 
D.100u/ml NAL
 
E.100u/mlLDH F .2.5mM NADH
G.酶稀释液 0.1MPIPES +0.125%BSA pH6.5

3.0操作规程:

3.1仪器参数设定

若仪器中无已保存参数,按以下参数设定。若已有相关参数,调取后确认。

检测方法:动力学扫描

测量波长:340nm 反应时间:600S

延迟时间:420S 积分时间:180S

系数/因子:4.02 测量温度:37±0.5℃
3.2 样品准备
 
若待测样品为固体,可以按 10mg 样品/1000ul 超纯水比例溶解。溶解后于 2-8 度放置 30min。
 
3.3 检测方法
 
3.3.1 在石英比色皿中加入 1.2ml 试剂 B, 0.5ml 试剂 C, 0.25ml 试剂 D, 0.25ml 试剂 E, 0.2ml 试剂 F,于 37 度孵育 5min。
 
3.3.2 加入 100ul  样品,温和混匀后开始测定。
 
3.3.3 测定结束后,记录相应数值:起始读数、△A/min、活性值(U/ml)。

3.3.1 活性值(U/ml)范围为 0.05-0.20U/ml,若超出范围,待测样品需经试剂 G 稀释后再次进行检测。
 
3.3.5 计算公式 活性(U/ml) =△A 340nm×4.02×df (稀释倍数)


 
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